日前液體乳產(chǎn)品中發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素M1超標(biāo)，引發(fā)公眾廣泛關(guān)注。黃曲霉毒素檢測常見的方法為經(jīng)免疫親和柱凈化后，采用HPLC（高效液相色譜法）、TLC（薄層層析法）、LC-MS/MS（液質(zhì)聯(lián)用）檢測以及ELISA（酶聯(lián)免疫）法。其中ELISA法使用較為普遍，但因其定量不準(zhǔn)確，只能作為陽性樣品的初篩工具。LC-MS/MS檢測因其具有靈敏度高、快速、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于食品安全檢測。

　　AB SCIEX一直致力于為用戶提供全方位的解決方案，在事件爆發(fā)的第一時(shí)間建立高效液相串聯(lián)質(zhì)譜法測定黃曲霉毒素的整體解決方案。

　　1.樣品前處理方法

　　適用于乳和乳制品中黃曲霉毒素的測定。

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　　稱取50g（精確至0.01g）混勻的試樣，置于50mL具塞離心管中，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

　?、诎l(fā)酵乳（包括固體狀、半固體狀和帶果肉型）：

　　稱取50g（精確至0.01g）混勻的試樣，用0.5mol/L的氫氧化鈉溶液在酸度計(jì)指示下調(diào)pH值至7.4，在9500轉(zhuǎn)/分鐘下勻漿5min，在水浴中加熱到35℃～37℃。在6000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15min。收集全部上清液，供凈化用。

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　　稱取10g（精確至0.01g）試樣，置于250mL燒杯中。將50mL已預(yù)熱到50℃的水加入到乳粉中，用玻璃棒將其混合均勻。如果乳粉仍未完全溶解，將燒杯置于50℃的水浴中放置30min。溶解后冷卻至20℃，移入100mL容量瓶中，用少量的水分次洗滌燒杯，洗滌液一并移入容量瓶中，用水定容至刻度，搖勻后分別移至兩個(gè)50mL離心管中，在6000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15min，混合上清液，用移液管移取50mL上清液供凈化處理用。

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　　稱取經(jīng)切細(xì)、過10目圓孔篩混勻的試樣5g（精確至0.01g），置于50mL離心管中，加2mL水和30mL甲醇，在9500轉(zhuǎn)/分鐘下勻漿5min，超聲提取30min，在6000轉(zhuǎn)/分鐘下離心15min。收集上清液并移入250mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30mL石油醚，振搖2min，待分層后，將下層移于50mL燒杯中，棄去石油醚層。重復(fù)用石油醚提取2次。將下層溶液移到100mL圓底燒瓶中，減壓濃縮至約2mL，濃縮液倒入離心管中，燒瓶用乙腈-水溶液（1 4）5mL分2次洗滌，洗滌液一并倒入50mL離心管中，加水稀釋至約50mL，在6000轉(zhuǎn)/分鐘下離心5min，上清液供凈化處理。

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　　稱取5g（精確至0.01g）試樣，置于50mL燒杯中，用20mL石油醚將其溶解并移于250mL具塞錐形瓶中。加20mL水和30mL甲醇，振蕩30min后，將全部液體移于分液漏斗中，待分層后，將下層溶液全部移到100mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中減壓濃縮至約5mL，加水稀釋至約50mL，供凈化處理。

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　?、倜庖哂H和柱的準(zhǔn)備：

　　將一次性的50mL注射器筒與親和柱上頂部相串聯(lián)，再將親和柱與固相萃取裝置連接起來。

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　　將上述樣品提取液移至50mL注射器筒中，調(diào)節(jié)固相萃取裝置的真空系統(tǒng)，控制試樣以2mL/min～3mL/min穩(wěn)定的流速過柱。取下50mL的注射器筒，裝上10mL注射器筒。注射器筒內(nèi)加入水，以穩(wěn)定的流速洗柱，然后，抽干親和柱。脫開真空系統(tǒng)，在親和柱下部放入10mL刻度試管，上部裝上另一個(gè)10mL注射器筒，加入4mL乙腈，洗脫待測物，洗脫液收集在刻度試管中中，洗脫時(shí)間不少于60秒。然后用氮?dú)饩従彽卦?0℃下將洗脫液蒸發(fā)至近干（如果蒸發(fā)至干，會(huì)損失待測物），用乙腈-水溶液（1 9）稀釋至1mL。

　　2.LC-MS/MS儀器條件

　?、僖合嗌V參數(shù)：

　　色譜柱：PhenomenexLunaPFP（2）3µm，100Å，50×2mm

　　柱溫：28℃

　　流動(dòng)相：含0.1%甲酸，甲醇/5mM乙酸銨水溶液（60:40）

　　流速：0.4mL/min

　　進(jìn)樣量：10µL

　　運(yùn)行時(shí)間：3min

　?、谫|(zhì)譜參數(shù)：

　　以下參數(shù)以API3200為例，具體參數(shù)和檢測靈敏度視儀器不同而有差異。

　　離子源參數(shù)：

　　CUR： 20 psi

　　IS： 5500 V

　　TEM： 425°C

　　GS1： 30 psi

　　GS2： 60 psi

　　Ihe： On

　　CAD： High

　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取離子流圖如下：

　　結(jié)論

　　AB SCIEX提供的全方位解決方案，可同時(shí)測定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5種黃曲霉毒素。

　　AB SCIEX公司提供免費(fèi)下載的用于測定黃曲霉毒素的iMethod，在Cliquid軟件中安裝后可直接使用。