利用SU5000和Gatan 3View 2XP 對老鼠肝細(xì)胞截面的高分辨截面觀測

圖1. 老鼠肝細(xì)胞高分辨BSE圖像

儀器：熱場發(fā)射SU5000 ， Gatan 3View 2XP

SEM（加速電壓: 2 kV, 真空模式: 高真空）

3View（圖像大小: 16k×16k, 像素點(diǎn)尺寸: 2 nm/pixel, 觀測區(qū)域: 33 mm×33 mm）

圖. 1 為老鼠肝細(xì)胞整體染色并樹脂包埋后的高分辨截面觀測結(jié)果，圖中可觀測到整個(gè)細(xì)胞及細(xì)胞器的分布。右圖是左圖黃框內(nèi)區(qū)域數(shù)字放大5倍后的結(jié)果，圖中可明顯觀測到細(xì)胞核 (N) 及其附近的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)(ER) ，線粒體(M) 及嵴(←), 高爾基體(G), 糖原顆粒 (▲)分布。

利用SU5000和Gatan 3View 2XP 對老鼠肝細(xì)胞超薄切片觀測及三維重構(gòu)

(a) 超薄切片觀測圖像  (b)三維重構(gòu)結(jié)果（長為10 μm的正方體）(c) 三維重構(gòu) (XY 面, YZ 面，XZ 面）

圖2. 老鼠肝細(xì)胞連續(xù)切片及三維重構(gòu)結(jié)果

圖. 2 為老鼠肝細(xì)胞染色樹脂包埋后連續(xù)切片（a）及三位重構(gòu)（b）（c）結(jié)果。 三維重構(gòu)圖像可以通過300張截面圖像堆疊計(jì)算得到。 由于熱場發(fā)射電子槍束流的穩(wěn)定性，可連續(xù)長時(shí)間地拍攝獲取300多張的圖像。通過三維重構(gòu)的結(jié)果可直觀地看到細(xì)胞尺寸結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞器的三維分布，能更多地獲取生物細(xì)胞的信息。

利用SU5000和Gatan 3View 2XP 對老鼠肝細(xì)胞三維重構(gòu)結(jié)果分析

圖3. (a) 連續(xù)截面BSE圖像堆疊圖像結(jié)果 (b) 線粒體及細(xì)胞核體分布 (紅色為線粒體，綠色為細(xì)胞核)

（c）線粒體的尺寸分布直方圖

通過連續(xù)切片獲得的三維重構(gòu)結(jié)果，可選擇性的得到所需信息，如線粒體的分布，結(jié)構(gòu)，尺寸數(shù)目的面分布及體分布等。 圖3為三維堆疊圖及后續(xù)分析出的線路體（紅色）及細(xì)胞核（綠色）的分布圖?？芍庇^地觀測到線粒體的形狀，結(jié)構(gòu)及分布。 圖2顯示的是線粒體的尺寸分布直方圖,可通過軟件直接得到線粒體的體分布和面分布，進(jìn)而分析細(xì)胞內(nèi)線粒體的數(shù)目及分布。

儀器： 熱場發(fā)射SU5000

Gatan 3View 2XP

三維重構(gòu)： Image Pro Premier 3D

(Media Cybernetics Inc.)

SEM條件：加速電壓　2 kV

真空模式　高真空

3View條件：圖像尺寸　8k×8k

像素尺寸　4.4 nm/pixel

觀測區(qū)域　36 mm×36 mm

切片厚度　50 nm

切片數(shù)　  300